Electroforesis: ¿Qué es y para qué sirve?

Introducción

• Técnica de laboratorio usada en biología molecular.
• Permite separar moléculas según su tamaño y carga.

Funcionamiento de la Electroforesis

• Diseñada en los años 30.
• Las moléculas cargadas eléctricamente se mueven a través de un medio sólido hidratado.
• Las moléculas con carga negativa se mueven hacia el ánodo (+).
• Las moléculas con carga positiva se mueven hacia el cátodo (-).
• Separación también por tamaño usando geles de poliacrilamida o agarosa.

Tipos de Electroforesis

• Electroforesis en acetato de celulosa: Uso de papel como soporte, rápido para proteínas.
• Electroforesis en gel de agarosa: Para moléculas grandes como ácidos nucleicos.
• Electroforesis en gel de poliacrilamida: Muy eficaz pero neurotóxico.
• Electroforesis capilar: Uso de un tubo fino de sílice, eficiente y requiere menos muestras.
• Isoelectroenfoque: Usa un campo eléctrico y gradiente de pH, mayor resolución.
• Electroforesis bidimensional: Combina isoelectroenfoque y gel de poliacrilamida.

Aplicaciones en Genética

• Separación de ARN y ADN para diagnóstico de enfermedades.
• Detección de enfermedades por expansiones de trinucleótidos.
• Monitoreo de progresión de tumores por inestabilidad de microsatélites.
• Estudios de paternidad y genética forense.
• Estudio de variantes genéticas como en el gen PER3.

Ejemplo Práctico: Variantes en PER3

Paso 1: Extracción y Preparación de Muestra de ADN

• Obtención de muestras de ADN de líneas celulares o sangre.
• Purificación del ADN.

Paso 2: Amplificación mediante PCR y Tinción

• Amplificación del gen PER3 mediante PCR.
• Uso del tampón de carga con glicerol y azul de bromofenol.

Paso 3: Proceso de Electroforesis

• Uso de gel de agarosa y tampón para conservar pH.
• Carga de muestras y controles en los pocillos del gel.

Paso 4: Análisis de Resultados

• Observación de bandas en gel para determinar genotipos como _PER3_4/5, _PER3_5/5, PER3_4/4.

Conclusión

• Importancia en estudios genéticos, diagnóstico y monitoreo de enfermedades.
• Ejemplo práctico demuestra utilidad en identificación de variantes genéticas.

Enlaces de Interés

• Phenotyping of PER3 variants.
• Glosario de genética sobre electroforesis.
• Video explicativo sobre la técnica de electroforesis.