Overview
Kuliah membahas sterilisasi, desinfeksi, pembuatan media pertumbuhan mikroba, serta pengaruh metode fisik dan kimia terhadap pertumbuhan bakteri melalui serangkaian praktikum.
Tujuan Praktikum
- Mahasiswa memahami tujuan sterilisasi dan desinfeksi.
- Mahasiswa dapat melakukan sterilisasi fisik dan kimia serta kerja aseptis.
- Mahasiswa mengenal media pertumbuhan mikroba dan fungsinya.
Prosedur Sterilisasi & Kerja Aseptis
- Semprot dan lap meja praktikum dengan alkohol 70%.
- Alat-alat praktik dan tangan disemprot alkohol 70% sebelum bekerja.
- Pembakar spiritus dinyalakan, alat dan media disterilkan di atas api sebelum digunakan.
- Jangan semprot alkohol ke api/lampu spiritus.
- Jarum inokulum dipanaskan, didinginkan, lalu digunakan untuk mengambil dan menanam koloni mikroba.
Pembuatan Media Nutrient Agar & Nutrient Broth
- Timbang nutrient broth 8 gram, campurkan dengan 500 ml aquades.
- Homogenkan campuran menggunakan hotplate magnetic stirrer pada suhu ±200°C.
- Larutan homogen berwarna bening atau kekuningan, lalu diukur pH (ideal 6,8-7,2).
- Tutup elemen dengan kapas dan plastik, sterilkan dengan autoklaf pada 121°C, 1,5 atm, selama 15-30 menit.
- Media dituangkan ke tabung reaksi/ cawan petri, ditutup, dan diinkubasi 24 jam untuk mendeteksi kontaminasi.
- Media disimpan suhu <30°C, digunakan maksimal 2 minggu.
Uji Pengaruh Sterilisasi dan Desinfeksi
Metode Fisik
- Media agar dibagi tiga sektor, tiap sektor diolesi biakan E. coli sesuai perlakuan.
- Alat steril dengan api sebelum pemakaian.
- Inkubasi pada 37°C selama 18-24 jam, jumlah koloni dihitung.
Metode Kimia
- Media agar dibagi empat sektor: kontrol, alkohol 70%, sabun, betadin.
- Kapas steril diusapkan ke jari, lalu ke media sesuai kelompok.
- Inkubasi pada 37°C selama 18-24 jam, hitung koloni, bandingkan tiap perlakuan.
Key Terms & Definitions
- Sterilisasi — Proses mematikan semua mikroorganisme pada alat dan bahan.
- Desinfeksi — Proses mengurangi jumlah mikroorganisme patogen pada permukaan.
- Kerja aseptis — Teknik menjaga lingkungan tetap steril selama praktikum.
- Media pertumbuhan — Nutrisi padat/cair untuk menumbuhkan mikroba di laboratorium.
- Autoklaf — Alat sterilisasi menggunakan uap bertekanan tinggi.
Action Items / Next Steps
- Lakukan praktikum sesuai prosedur di atas.
- Catat dan bandingkan hasil pertumbuhan koloni pada tiap sektor perlakuan.
- Simpan media pada suhu yang dianjurkan dan gunakan dalam masa simpan yang ditentukan.