Catatan Kuliah: Karminasi Hewan Coba

Pendahuluan

• Diskusi tentang persiapan organ atau jaringan untuk penelitian.
• Penting untuk memahami variabel yang akan diteliti.

Variabel Penelitian

1. Kadar Kreatinin
2. Histologi untuk Fibrosis
3. Ekspresi Agen Profibrofi
   • Ekspresi pada level DNA, RNA, atau protein.
   • Level yang paling handal: Protein (RTI) > RNA > DNA.

Persiapan Sebelum Terminasi

• Hewan harus disiapkan sebelum proses terminasi.
• Penyimpanan RNA dan RTI harus di bawah -80°C.

Prosedur Pengambilan Sampel

Pengambilan Darah

• Metode Pengambilan:
  • Vena Retroorbital: Tinggi keberhasilan, banyak darah.
  • Vena Ekor: Lebih sulit, tergantung ukuran hewan.
  • Kardia Pancer: Bisa dibuka atau tidak.
• Proses pengambilan darah:
  • Menggunakan kapiler jub.
• Penyimpanan Serum:
  • Putar di 10.000 RPM pada 4°C.
  • Supernatant serum dapat disimpan di -20°C.

Pengambilan Organ

• Organ dibagi menjadi dua bagian:
  1. Untuk Histopatologi (dimasukkan ke parafin).
  2. Untuk RNA atau Protein.
• Proses Preservasi:
  • Histopatologi: Gunakan Normal Buffer Formalin (NBF) atau 10% Formalin, 4% PFA.
  • Simpan organ di NBF selama 24-48 jam sebelum pembuatan parafin.
  • RNA/Protein: Simpan di -80°C atau nitrogen cair.

Penggunaan RNA Preservation Solution

• Jika tidak ada minus 80°C, gunakan RNA Preservation Solution.
• Proses Penyimpanan Jaringan:
  • Masukkan jaringan ke dalam tabung dengan RNA solution pada suhu ruangan (1-3 hari).
  • Pada 4°C bisa bertahan beberapa bulan, -20°C bertahan tahun.

Kesimpulan

• Persiapan yang baik sangat penting sebelum proses terminasi untuk mendapatkan hasil penelitian yang akurat.
• Menyiapkan semua perangkat dan solusi yang diperlukan sebelum melakukan sacrifice.