Electrophorèse des protéines : Gel de Polyacrylamide vs Gel d'Agarose vs Acétate de Cellulose

Objectif

Séparer et identifier les protéines d'un mélange par une des techniques d'électrophorèse en laboratoire.

Supports d'électrophorèse

• Papier : Séparation de petites molécules (acides aminés).
• Acétate de cellulose : Séparation des protéines en activité.
• Agarose et Amidon : Séparation des grandes molécules d'ADN, protéines, lipoprotéines.
• Polyacrylamide et Polyvinyle : Séparation fine de protéines et acides nucléiques.

Séparation et Identification des Protéines

Gel de Polyacrylamide

• Prévue pour mars/avril 2024.
• Utilisé pour une séparation très fine des protéines.

Gel d'Agarose

• Utilisé pour séparer et identifier les protéines sériques.
• Helena SAS MX : Plus couramment utilisé.
• Préparation du gel 1 % agarose.
• Solutions de dépôt : Ovalbumine, Caséine, Lysozyme avec tampon de charge.
• Électrophorèse à voltage constant en tampon TBE pH 8,6.
• Révélation des protéines : Rouge Ponceau et Bleu de Coomassie.
• Conclusion sur les méthodes de révélation :
  • Rouge Ponceau peu sensible et délicat à photographier.
  • Bleu de Coomassie plus sensible, coloration irréversible.

Comparaisons des Méthodes

• Bleu de Coomassie est préférable pour la sensibilité.

Analyse des Protéines Sériques

Composition du Sérum Humain

• Protides (65 à 80 g/L) se divisent en :
  • Sérum-albumine : Pression osmotique, transport d'acides gras, médicaments.
  • Globulines :
    • α-globulines : Processus inflammatoire.
    • β-globulines : Fibrinogène, impliqué dans la coagulation.
    • γ-globulines : Immunoglobulines M, G, D, E, A.

Diagramme d'Ionisation

• Calcul à partir des résultats d'électrophorèse.
• Indiquer charges électriques à pH 8,6.
• Déterminer position de dépôt sur l'acétate de cellulose.

Séparation sur Acétate de Cellulose

Objectif

Réaliser une séparation électrophorétique des protéines sériques et analyser le profil.

Analyse Complète

• Hémogramme, bilan lipidique, glycémique, rénal, hépatique, coagulation et dosage protéique.

Réalisation

• Électrophorèse à partir de sérum humain.
• Densitogramme et analyse de pathologies possibles.

Tutoriels et Techniques

• Tutoriel pour établir le diagramme d'ionisation.
• Tutoriel MESURIM pour densitogramme.
• Création de documents numériques pour analyse.

Conclusion

• Importance des techniques d'électrophorèse dans la séparation et l'analyse des protéines pour le diagnostic médical.