egal ob sie gas chromatographie haben oder htc oder ein anderes sollen com/abo grafischer verfahren die quantitative auswertung die funktioniert eigentlich immer identisch deswegen lohnt es sich wirklich sich damit auszukennen willkommen zu diesem land video es richtet sich vor allem an auszubildende aus dem labor berufen als auch vor allem chemielaborant innen oder chemielaboranten aber auch cds oder studierende vorausgesetzt wird dass sie hämisch analytisch rechnen können preis ausrechnen sollten zu beherrschen und auch an einer stelle wird das lambert berschick gesetz verlangt legen sie bitte stift papier und taschenrechner bereit wir werden hin und wieder was aufschreiben es wird nämlich relativ unterrichts ähnlich laufen unter www wvo berufe de im ordner c 3 cl also chemielaboranten drittes lehrjahr finden sie in arbeitsplatten mit dem titel quantitative verfahren in der chromatographie ich würde dieses arbeitsblatt an ihrer stelle downloaden und ausdrucken zumindest die ersten beiden seiten weil auf diesen seiten sind aufgaben eingebettet die wir eben gemeinsam in diesen lernt video besprechen und diese dass sie dann eben hier auch eintragen und ausfüllen sollen teil eins also quasi dieses lernt video was sie gerade schauen beschäftigt sich mit dem externen standard wichtige schlagworte werden sein die ein punkt kalibrierung merken kalibrierungen kalibriert factor oder auch der response faktor damit beschäftigt sich eben dieses erste land video die weiteren plan videos also teil 2 bis 2 4 beschäftigen sich dann mit dem hit der flächen prozent methode und dem internet standard lesen sie doch zu beginn grad mal die ersten einleitenden sätze durch auf diesem arbeitsblatt und auch den abschnitt eins externer standard ein punkt kalibrierung bis zur aufgabe 1.1 wo sie ein solches kaliber diagramm zeichnen sollen also drücken sie jetzt gerade auf pause und beschäftigen sie sich selbst allein mit dem arbeitsblatt bis zu der stelle das kennzeichen des externen standards ist dass man ein probelauf macht und dass man einen oder mehrere kandidaten durchführen ein probelauf ist es ja so dass nicht nur der analyt drin ist dessen gehalt nicht bekanntesten den wir bestimmen wollen sondern es sind ja noch andere bestandteile drin deswegen sieht das programm eben auch entsprechend kompliziert aus wir haben nämlich hier mehrere picks im idealfall entspricht jeder pickt eben einem stoff der in der probe drin ist einer davon ist eben der analytik soll bei den country läufen hat man ja mit kd trier lösungen mit bekanntem gehalt gearbeitet und deswegen ist das programm hier viel einfacher weil wirklich nur dieser kalibriert stoff drin ist und nichts anderes wenn man jetzt den kampf lauf gemacht hat weiß man welche gehalt welche fläche ergibt und da gibt es eben einen mathematischen zusammenhang zwischen gehalt und fläche den mann ermitteln kann zumindest an einer kalibrierung oder mit hilfe mehrerer kalibriert und wenn man eben diesen mathematischen zusammenhänge rausgekriegt hat dann kann man hergehen und kann mit der fläche des analytics im probelauf eben mit hilfe dieses mathematischen zusammenhangs dann auf den gehalt an analyten in der probe schließen ich würde dass hier alles in ihre unterlagen übernehmen zb in ein heft schreiben und weiterhin würde ich als definition zum externen standort aufschreiben neben dem probelauf werden ein oder mehrere kali vier läufe mit bekannten gehaltener nix durchgeführt in der aufgabe 1.1 sollten sie ein solches kalibriert diagramm zeichnen und wie man sieht gibt es eben einen linearen zusammenhang zwischen dem gehalt und dem signal meistens ist damit das signal fläche gemeint ich könnte es in zukunft immer mit es ab und bei der ein punkt kalibrierung muss man davon ausgehen dass das doch zusammenhang so ist dass sich eine ursprungs gerade ergibt das heißt eine lösung die einen gehalt von 0 hat von der wird angenommen dass sie auch ein signal oder eines signals fläche von 0 ergibt und wenn man diese annahme trifft und eben der gehalt proportionales zur fläche dann kann man eben eine ein punkt kalibrierung durchführen in der praxis ist es allerdings häufig so dass eine lösung die ein gehalt von 0 hat trotzdem ein signal an zeigt das nicht ganz exakt null es zum beispiel kann es sein dass ihm der mobilen phase dokumente graffy ein bestandteile enthalten ist der auch detektiert wird und dann ist eben obwohl anna lüth nichts drin es das signal nicht 0 und man kann aber jetzt meistens in solchen fällen eine justierung durchführen das heißt man sorgt dafür dass die anzeige trotzdem auf null sich stellt und man kann also rechts daneben schreiben justierung das nennt man auch häufig blind wert auf null stellen oder ablenken dass der detektor wird so eingestellt dass er bei einem gehalt von 0 auch es gleich null anzeigt lesen sie jetzt die aufgabe 1.2 durch und lösen sie dann die aufgabe a wenn 16 49 nanogramm pro milliliter eine fläche von 17.000 184 erzeugen dann kann man eben über dreisatz bildung auch berechnen welchem gehalt eine lösung hat die 14 1357 flächen einheiten erzeugt und wenn man einen solchen preis so notiert dann kann man sich also das so ausrechnen dass geteilt durch das also iks durch 16 49 ist das gleiche wie das geteilte ich dass diese wie 14 1357 durch 17 1984 eine solche gleichung muss man dann bloß doch nachwuchs umstellen und dann kann man eben das berechnen wir um sie die patienten bilden ist übrigens egal sie können also zum beispiel das geteilt durch das ist die das geteilt durch das rechnen sie können aber zb die patienten auch so um bilden das geteilt durch das ist das gleiche wie das geteilt durch das jedes mal müssen sie bloß nix richtig auflösen und schon kommt das ergebnis richtig raus sie dürfen bloß nicht die kurzen über kreuz bilden als nächstes sollten sie sich kurz überlegen welche nachteile mit dieser methode einhergehen und wind unter beibehaltung einer ein punkt kalibrierung diese nachteile minimiert werden können drücken sie also bitte auf pause machen sich selbst gedanken kurz darüber also es gibt im wesentlichen zwei nachteile die man aber auch gut kompensieren kann der erste nachteil ist der dass es eben zeitlichen schwankungen gibt es chromatographie systems unter teck der empfindlichkeit so konstant ist das nämlich nicht wenn der detektor zb seine betriebstemperatur erreicht hat oder im laufe der zeit weil er sich erwärmt kann sein dass die detector empfindlichkeit sich verändert und deshalb sollte man die beiden läufe unmittelbar nacheinander starten und zwar auch mit kurzen zeitlichen abstand durchführen der zweite nachteil der eine punkt kalibrierung ist dass man natürlich eine solche proportionalität annimmt zwischen dem gehalt und der signal intensität dass marke für kurze gehalts bereiche auch stimmen aber je weiter der kalibrierung punkt vom probe punkt weg ist desto stärker kann es da zu abweichungen kommen und mit so einer ein ton kalibrierung werden diese abweichungen nicht berücksichtigt so linear wie es hier im idealfall angedeutet ist ist es nämlich in der praxis nicht man kann jetzt aber hergehen und einen zweiten kalibriert punkt nehmen der näher am ober punkt liegt das heißt mit dem ersten kalibriert punkt macht man erst mal einen solchen eine solche berechnung und weiß dass der gehalt zum beispiel ungefähr bei 13,78 nanogramm pro milliliter liegt und das wissen dass der probe gehalt ungefähr bei 13,78 blickt kann man eben eine zweite kann die erlösung herstellen die ganz nahe am gehalt das rot der probe liegt zum beispiel auch 13,78 oder 13,8 oder vielleicht 14 nanogramm pro milliliter man kann also den kalli vier punkten die nähe befördern das probe punktes und dann eben noch mal eine bestimmung durchführen und da jetzt hier nicht so große gehalts bereiche betroffen sind sondern das ganze viel näher liegt am ober punkt sind solche proportionalität viel stärker gegeben und die genauigkeit ist dann auch viel höher sie können also schreiben je größer der gehaltsunterschied desto stärkere abweichungen vom proportionalen zusammenhang möglich folge fallen die punkte möglichst nahe an probe punkt setzen sie müssen aber nicht in dreisatz nutzen sie können auch mit einem kaliber faktor rechnen und das ist im nächsten abschnitt beschrieben steht jetzt ja auch da statt mit dem drei satz zu rechnen kann man auch mit einem kaliber faktor f rechnen er gibt den gehalt pro signal einheiten an er kann aus den daten des kalifen laufs berechnet werden das heißt ja gehalt pro signal einheiten ist eben dieser kalibrieren faktor und das kann man ja bestimmen weil sie kennen den gehalt ihrer kalibriert lösung und sie wissen welches signal erzeugt wurde zum beispiel wie viel flächen einheiten und dann hat man eben dieses es so und mit hilfe von f lässt sich dann der gehalt aber berechnen das heißt wenn sie jetzt diese scannern aus dem kalibrieren auf dann können sie das einfach multiplizieren mal den signal einheiten die sie beim probelauf haben und dann kriegen sie eben den gehalt ihrer probe raus das ist also einfach diese formel umgestellt das ist die gleiche formel wie hier und mit diesen beiden formen sollen sie nochmal die gleiche aufgabe von vorher nochmal lösen und kia hinschreiben das ergebnis drücken sie jetzt bitte also auf pause und rechnen dass mit diesem es nochmal aus das ergebnis bei uns kommt raus 16,49 nanogramm pro milliliter durch 17.000 184 area units also für ein f kommt raus 96 x 10.4 nanogramm durch milliliter mal area units und mit diesem app kann man alt hergehen und wenn man den x der probe fläche kommt man eben auf den probe gehalt beta und da kommt auch raus natürlich 13 78 nanogramm pro milliliter man kann den externen standort auch als zwei punkte kalibrierung oder auch als mehrpunkt kalibrierung durchführen damit beschäftigt sich der abschnitt 2 drücken sie jetzt also bitte auf pause lesen zu die einleitenden abschnitte und beantworten zu die aufgabe 2.1 bei der zwei punkt kalibrierung haben wir also folgende situation wir haben zwei kalibriert punkte und zwischen diesen beiden kalibriert punkten sozusagen ein geklammert durch diese liegt der probe punkt und diese methode ist dann besonders genau auch hier wieder wenn eben die beiden kalibriert punkte möglichst mal am probe punkt legen selbst wenn eigentlich gar kein linearer zusammenhang besteht zwischen dem gehalt und das signal fläche wenn man diesen abstand hier ganz ganz klein wählt kann man von einem quasi die narren zusammenhang die sind ganz kleinen bereich ausgehen also ist es auch hier sehr wichtig diese punkte nahe am probe punkt zu setzen die auswertung funktioniert ganz allgemein über eine cali p geraten gleichung für den fall dass man wirklich nur zwei punkte hat kann man das aber auch direkt mit dem taschenrechner berechnen ein gehaltszuwachs von 75 milligramm pro liter zwischen gehalt 1 und gehalt 2 entspricht einem flächenzuwachs von 2037 area units dafür habe ich einfach die beiden flächen voneinander abgezogen der beiden kalibriert punkte und der zuwachs zwischen kalibrieren punkt eins und im probe punkt der beträgt 1752 area units mit dem drei satz kann ich also berechnen wie groß hier der gehaltszuwachs is bezüglich des zeitpunkts 1 also von gehalt 1 zu diesem probe punkt und das geht auch mit dem drei satz ich habe hier die die patienten so ungebildet dass ich das geteilt durch das ausgerechnet habe und das ist das gleiche wie das geht heute ich das aber wie ich schon mal vorher gesagt habe egal worum sie die patienten bilden sie müssen nachher bloß nachwuchs richtig auflösen und schon kommt das ergebnis raus und zwar hier kann man ausrechnen also wenn ein flächenzuwachs von 2.730 area view mit 7,5 millimeter beträgt dann beträgt ein flächenzuwachs von 1752 eben einen gehaltszuwachs von 6,4 5 milligramm pro liter das ist also der gehaltszuwachs gegenüber calibre punkt eins also der so viel gehalt hat die probe mehr als der kalibriert punkt 1 der probe gehalt beträgt damit 30 milligramm pro liter also das von der kalibrierung einsplus die 6,4 5 milligramm pro liter also plus dem zuwachs macht insgesamt 36 45 milligramm pro liter und sie sehen das ergebnis weicht schon deutlich ab von dem 35 milligramm pro liter die man raus bekommen hätte wenn man das ganze mit einer 1 punkt kalibrierung aus werden würde das wäre aber falsch in abschnitt drei geht es um den sehr wichtigen begriff des response faktors lesens sich bitte die aufgabe 3.1 durch und beantworten sie diese erst mal alleine beim stoff y werden zweimal benötigt um 1000 flächen einheiten zu erzeugen beim stoff z reicht schon einmal aus um dieselbe fläche zu erzeugen mit anderen worten der stoff wird empfindlicher detektiert man kann also bei als antwort auf schreiben wird empfindlicher detektiert da ein kleinerer gehalt ausreichte um dieselbe fläche also 1000 area units zu erzeugen ein quantitatives maß für die detektion empfindlichkeit ist das sogenannte response faktor und am besten ist man kann definiert denn über eine solche geraden gleichung und zwar eine die durch den ursprung geht das heißt man muss vorher unter umständen justieren und der response faktor ist nichts anderes als die signal fläche pro gehalt und das ist also letzten endes die steigung auch dieser geraden also delta y durch delta ex und da wir hier auf der y-achse die signal fläche haben und auf der x-achse ebenen gehalt aufgetragen haben kann man das ganze auch so definiert durch iks je höher der response faktor ist desto steiler ist die gerade und desto empfindlicher wird ein stoff detektiert dann reichen schon ganz kleine gehalts mengen um das signal schon relativ stark anwachsen zu lassen wir können also bei der b aufschreiben rfs gleich signal fläche durch gehalt oder eben durch xo bei der ausgabe c geht es ja um den mathematischen zusammenhang zwischen dem calibra faktor 11 und dem response faktor sie erinnern sich samt war vorhergesagter calibra faktor ist gerade umgekehrt definiert das ist deck gehalt pro signal fläche und deswegen stehen die beiden auch im reziproken zusammenhang also der erfährt ist nichts anderes als 1 durch kaliber factor oder eben 1 durch f man muss hier aber ein bisschen aufpassen weil manchmal wird der calibra faktor nicht unterschieden von response faktor in der literatur und die beiden begriffe gleichgesetzt solche kaliber geraten begegnen uns ja nicht nur in der promo grafik sondern auch bei sehr vielen anderen mathematischen gesetzmäßigkeiten in der analytik und ein sehr bekanntes beispiel ist das lamm bettwäsche gesetz also die proportionalität zwischen der anzahl bands unter konzentration und es ist ja auch die hier kann man natürlich auch eine solche steigen definieren dieser kalibriert geraden oder diese szenarien zusammenhangs und diese steigung die wird halt hier eben y genannt beim lambert bärchen gesetz das ist also hier auch wieder durch c also die delta y durch delta ickx und lambert wer schon gesetz hat halt diese response faktor den dessous kürzel y bekommen und man spricht auch von einem absatz von absorptions koalition häufig gibt es noch andere abhängigkeiten beim namen bärchen gesetz zum beispiel ist es noch die wichtige die nehme ich jetzt hier einfach mal mit 1 zentimeter an dass man das eben so definieren kann sonst würde hier im ländern noch die auftauchen aber sie sehen auf jeden fall dass dieses konzept eines response faktors eben nicht nur in der chromatographie angewendet werden kann und auch beim lamm bärchen gesetz gilt je größer die steigung ist eines solchen zusammenhangs desto empfindlicher wird eben dieser stoff detektiert bei der messe wellenlänge und desto höher ist eben der entsprechende response faktor hiermit sind wir auch ans ende des lernvideos angekommen die nächsten abschnitte auf diesem lern skript die werden in den folgenden teilen des lernvideos oder dieser lern videoreihe behandelt also da geht es dann um die flächen prozent methoden um dem und um die methoden des internen standards