buenas en este vídeo vamos a hablar como se puede estudiar las expresiones genes mediante técnicas moleculares se pueden abordar dos estrategias una que identifica en el adn producto la expresión y otra que identifica las proteínas en primer lugar vamos a hablar de las técnicas para identificar en la red de res una técnica que permite analizar la expresión de un gen o varios genes en diferentes muestras ya sea en células grupos celulares o tejidos por ejemplo si quisiéramos saber en qué tejido se expresa la proteína hace 2 el receptor de entrada de virus arco 2 requeríamos obtener adn de diferentes tejidos una vez obtenido el adn nos convertiríamos en adn de yebra para estabilizar la información genética ya que el adn es mucho más estable la red para éstas requerimos las reacciones con las enzimas retro tracking tasa y adn y polímeros una vez obtenido ese dna requerimos de prime que son fragmentos de nucleótidos que presenta las secuencias que complementan con el gen que queremos amplificar para que ocurra la interacción del prime con una y con una molécula de adn requiere de una desnaturalización calórica que separa ambas cadenas de adn y luego se baja la temperatura a una temperatura que permite la hibridación del prime up con la molécula de luego sube su la temperatura a 72 grados en este caso que la temperatura por la cual la polimerasa proveniente de organismos termófilos copia las moléculas de adn esto se repite en varios ciclos de manera que haya un crecimiento exponencial y luego de aproximadamente 30 ciclos se obtienen la cantidad suficiente como para poder ser analizada por un gel de álvaro soft que separa las moléculas de adn por tamaño y luego por tensiones se pueden ver si está presente una banda que se corresponda al tamaño del de la molécula de adn de hace 2 en donde en cada lugar donde se ve una banda significa una expresión de este gen en este tejido por tanto ésta tenga permite iniciar la expresión del gen pero hay que tener claro que no cuantifica que son en este caso las veces aéreas en tiempo real donde se requiere una estrategia para poder evidenciar el adn que se está amplificando para esto hay dos estrategias que se utilizan una son floro foros que interaccionan con la molécula de doble hebras de adn emitiendo una fluorescencia dónde está sedada interacción otra técnica es utilizar un tercer prime quien presentó un flor o foro pero que no florece cuando está asociado el 1er este primer este tercer prime en vida en lugar distinto a los prime skin vidas para amplificar cuando la polimerasa estas generan a la copia y se topa con este tercer primer lo degrada y el cloro foro que es liberado de ese primer ahí pueden florecer y entonces se emite una señal de esta manera obtenemos fluorescencia si ocurre amplificación y podemos saber cuántos ciclos se requieren para poder evidenciar esa fluorescencia en las diferentes muestras cuanto antes ocurre y en mayor magnitud indica una mayor cantidad de este caso en la región en que estaba presente la muestra que lo vemos aquí en la gráfica roja pero en el verde sería una menor representación de ese gen o en el caso azul una representación nula otra pregunta que nos podemos hacer es qué genes se expresan y no si se expresa un gen determinado para analizar qué genes expresa al que estoy de transcriptoma el material que nosotros estamos analizando el traje tomas el conjunto de todas las moléculas de adn presentes en una célula o grupo de células en un momento determinado diferentes células ips en diferentes genes cada tejido o tipo de celular posee un tracking toma único las tienes utilizadas para identificarlos pueden ser micro reloj y secuencia y secuenciación masiva en la técnica de microarreglos consiste en una placa que contiene múltiples pozos y donde en cada pozo hay adn correspondiente a un gen presente en el genoma de la muestra que queremos analizar obtenemos en la reina de las diferentes muestras las convertimos hace n y las marcamos con un cero foro en este caso tenemos dos muestras rojo y verde estas muestras se siembran en la placa y se permite que ocurra hibridación con los diferentes órdenes provenientes de diferentes genes presentes en cada uno de los pozos luego se lava y se analiza la señal que emite cada uno de los pozos si un pozo tiene que al color rojo o verde indica que el gen que está presente en ese pozo se expresa por es expresada por alguna de las muestras por ejemplo si hay inicio en rojo ese gen se expresa en la muestra que tenemos en rojo y si es verde en la verde y podemos podemos superponer las dos señales y ver qué genes se expresan de manera diferenciada y qué genes se expresan y cuáles no se expresan a la derecha se ve el resultado de un experimento de microarreglos bien otra técnica utilizada para analizar transcriptoma es la secuenciación masiva de adn para esto se obtiene el adn se fragmenta se convierte hace enea este es el de pequeños fragmentos de cereal son secuencia 2 y luego se las secuencias se alinea cada una de las secuencias se alinea con el genoma entonces los genes que tienen una alta representatividad de fragmentos indican que están muy expresados los que tienen poca cantidad poco expresado y los que no tienen no están expresados y esto se puede analizar en código de colores en este caso vemos un experimento donde hay nueve muestras y que se analizaron tres grupos de genes y vemos que una columna se requiera una muestra y los genes que se encienden en el rojo indican que estaban muy muy muy representados de la muestra blanco medianamente representado y azul poco representados vale aclarar que los datos obtenidos por micro arreglos y secuenciación masiva son depositados en base de datos de manera que si nosotros queremos saber si un gen se expresa en determinado tejido podemos ir a esas bases de datos y analizarlas por ejemplo con la pregunta que nos habíamos hecho con la proteína de hace dos podemos ir a la base de datos de humanos y analizar los en los tejidos donde se encuentra presente ahora pasaremos al análisis la expresión de fines desde el punto de vista la para identificar proteínas en diferentes muestras por un lado podemos utilizar anticuerpos específicos de retinas que busquemos hay varias técnicas que están explicadas en otros vídeos y no hablaremos de ellas en este por otro lado porque estoy a la proteómica que presentan diferentes muestras una de las técnicas utilizadas para analizar población de proteínas es electroforesis en dos dimensiones donde podemos separar las proteínas por su punto eléctrico y por tamaño recordemos que el punto es eléctrico es el ph por el cual la proteína tiene carga neta cero entonces en un gradiente de ph ya aplicando a una diferencia de voltaje las proteínas van a mirar hasta que alcance en el ph donde adquieren carga neta cero luego esta proteína se inicia la carga y se hace una segunda corrida con diferencia de voltaje que permite separar por tamaño de esta manera obtenemos puntos que tiene este es el resultado experimental de un gen donde cada punto indica una proteína específica supongamos que tenemos dos muestras podemos analizar qué proteínas aparecen en una muestra respecto a la otra en el ejemplo la muestra aparece una proteína nueva que no está presente la muestra bien y podemos analizar esta muestra u otras por espectrometría de masa identificar a qué proteína se corresponde y finalmente otras técnicas biología molecular se utiliza la inmunología por ejemplo transgénesis generación organismos u líneas celulares no cabo encendido y diferenciado de genes generaciones siglos y organismos quiméricos así como la producción de proteínas recombinantes por ejemplo anticuerpos y con citoquinas entre otros muchas gracias