Techniques Histologiques

Introduction

• La technique histologique est un ensemble d'étapes pour visualiser un prélèvement au microscope.
• Étapes principales : Prélèvement, Fixation, Déshydratation, Inclusion, Microtomie, Coloration, Observation au microscope.

1. Prélèvement

• Peut être effectué sur un cadavre, des pièces opératoires, ou des biopsies.

2. Fixation

• Immobilisation des constituants cellulaires et blocage des réactions enzymatiques.
• Prévention de la putréfaction bactérienne.
• Le fixateur le plus commun est le formol, utilisé en quantité 10x supérieure au volume du tissu.

3. Déshydratation

• Préparation pour l'inclusion à la paraffine, qui est hydrophobe.
• Utilisation de bains d'alcool de croissant (70% à 100%) et de toluène.

4. Inclusion

• Utilisation de la paraffine fondue (56-58°C).
• Refroidissement pour obtenir des blocs de paraffine.

5. Microtomie

• Utilisation du microtome pour obtenir des coupes fines (~5 micromètres).
• Formation d'un ruban de coupes tissulaires.

6. Étirement et Coloration

• Étirement des lames de paraffine sur des lames de verre chauffées.
• Coloration HES :
  • Hématéine : Noyaux (violet)
  • Éosine : Cytoplasmes (rose)
  • Safran : Fibres de collagène (jaune)

7. Observation

• Montage entre lame et lamelle avec résine synthétique.
• Observation au microscope optique.

8. Interprétation

• Analyse des images basées sur la reconnaissance de formes, contrastes, couleurs.
• Attention aux artefacts ou erreurs dans la technique.

Différences avec la Microscopie Électronique

• Fixateur : Glutaraldéhyde.
• Post-fixation : Tétraoxyde de smium.
• Inclusion : Résines d'époxy.
• Coupes : Ultra-microtome (~80 nm).
• Techniques de contraste au lieu de coloration.
• Différence de faisceau : Photons vs Électrons.

Conclusion

• Importance de chaque étape pour l'analyse histologique.
• Différences clés entre la microscopie optique et électronique.