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Bases de la Citometría de Flujo
May 28, 2024
Bases de la Citometría de Flujo
¿Qué es la Citometría de Flujo?
Técnica utilizada en clínica e investigación.
Evalúa propiedades de refracción, dispersión lumínica y fluorescencia de células/partículas al pasar por un rayo de luz.
Parámetros Medidos
Difracción de luz: SKATER
Informa sobre el tamaño celular.
Detectada en dirección frontal al láser.
Refracción y Reflexión: TSI Scooter
Proporciona información sobre la granularidad y complejidad celular.
Detectada en un ángulo de 90 grados al láser.
Fluorescencia:
Detectada por diferentes detectores según la longitud de onda.
Funcionamiento de un Citómetro
Suspensión celular pasa a través del láser.
Reflexión Difracción (SKATER):
Tamaño celular.
Refracción Reflexión (TSI Scooter):
Complejidad celular.
Detectores de Fluorescencia:
Detectan diferentes longitudes de onda.
Datos procesados y analizados por computadora.
Análisis de Muestras
Uso de anticuerpos conjugados a fluoróforos para identificar células específicas (ej. CD4, CD8, CD3).
Incubación de células con anticuerpos.
Si los anticuerpos se unen, las células fluorescerán al pasar por el láser.
Proceso de identificación:
Fluorescencia de CD3:
Identifica linfocitos T.
Fluorescencia de CD8 y CD4:
Diferencia entre linfocitos T CD8+ y CD4+.
Gráficos de Histograma:
Muestran niveles de expresión de moléculas en células (ej. PD-1).
Comparación entre células de pacientes y controles normales.
Aplicaciones de la Citometría de Flujo
Identificación, caracterización y separación de poblaciones celulares.
Cuantificación específica de células.
Análisis de funciones celulares (proliferación, fagocitosis, apoptosis).
Determinación de cantidad de ARN o ADN en células.
Ejemplo de Separación Celular
Separación de CD8+ y CD4+:
Marcaje con anticuerpos.
Citómetro especial carga diferencialmente gotitas conteniendo las células.
Aplicación de campo magnético separa las células según carga (negativo/positivo).
Recuperación de células específicas mediante tubos de recolección.
Conclusiones
Técnica versátil con múltiples aplicaciones en investigación y clínica.
Permite un análisis detallado de características y funciones celulares.
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