Bases de la Citometría de Flujo

May 28, 2024

Bases de la Citometría de Flujo

¿Qué es la Citometría de Flujo?

  • Técnica utilizada en clínica e investigación.
  • Evalúa propiedades de refracción, dispersión lumínica y fluorescencia de células/partículas al pasar por un rayo de luz.

Parámetros Medidos

  • Difracción de luz: SKATER
    • Informa sobre el tamaño celular.
    • Detectada en dirección frontal al láser.
  • Refracción y Reflexión: TSI Scooter
    • Proporciona información sobre la granularidad y complejidad celular.
    • Detectada en un ángulo de 90 grados al láser.
  • Fluorescencia:
    • Detectada por diferentes detectores según la longitud de onda.

Funcionamiento de un Citómetro

  • Suspensión celular pasa a través del láser.
    • Reflexión Difracción (SKATER): Tamaño celular.
    • Refracción Reflexión (TSI Scooter): Complejidad celular.
    • Detectores de Fluorescencia: Detectan diferentes longitudes de onda.
  • Datos procesados y analizados por computadora.

Análisis de Muestras

  • Uso de anticuerpos conjugados a fluoróforos para identificar células específicas (ej. CD4, CD8, CD3).
  • Incubación de células con anticuerpos.
    • Si los anticuerpos se unen, las células fluorescerán al pasar por el láser.
  • Proceso de identificación:
    • Fluorescencia de CD3: Identifica linfocitos T.
    • Fluorescencia de CD8 y CD4: Diferencia entre linfocitos T CD8+ y CD4+.
  • Gráficos de Histograma:
    • Muestran niveles de expresión de moléculas en células (ej. PD-1).
    • Comparación entre células de pacientes y controles normales.

Aplicaciones de la Citometría de Flujo

  • Identificación, caracterización y separación de poblaciones celulares.
  • Cuantificación específica de células.
  • Análisis de funciones celulares (proliferación, fagocitosis, apoptosis).
  • Determinación de cantidad de ARN o ADN en células.

Ejemplo de Separación Celular

  • Separación de CD8+ y CD4+:
    • Marcaje con anticuerpos.
    • Citómetro especial carga diferencialmente gotitas conteniendo las células.
    • Aplicación de campo magnético separa las células según carga (negativo/positivo).
    • Recuperación de células específicas mediante tubos de recolección.

Conclusiones

  • Técnica versátil con múltiples aplicaciones en investigación y clínica.
  • Permite un análisis detallado de características y funciones celulares.