Bases de la Citometría de Flujo

¿Qué es la Citometría de Flujo?

Técnica utilizada en clínica e investigación.
Evalúa propiedades de refracción, dispersión lumínica y fluorescencia de células/partículas al pasar por un rayo de luz.

Difracción de luz: SKATER
- Informa sobre el tamaño celular.
- Detectada en dirección frontal al láser.
Refracción y Reflexión: TSI Scooter
- Proporciona información sobre la granularidad y complejidad celular.
- Detectada en un ángulo de 90 grados al láser.
Fluorescencia:
- Detectada por diferentes detectores según la longitud de onda.

Suspensión celular pasa a través del láser.
- Reflexión Difracción (SKATER): Tamaño celular.
- Refracción Reflexión (TSI Scooter): Complejidad celular.
- Detectores de Fluorescencia: Detectan diferentes longitudes de onda.
Datos procesados y analizados por computadora.

Uso de anticuerpos conjugados a fluoróforos para identificar células específicas (ej. CD4, CD8, CD3).
Incubación de células con anticuerpos.
- Si los anticuerpos se unen, las células fluorescerán al pasar por el láser.
Proceso de identificación:
- Fluorescencia de CD3: Identifica linfocitos T.
- Fluorescencia de CD8 y CD4: Diferencia entre linfocitos T CD8+ y CD4+.
Gráficos de Histograma:
- Muestran niveles de expresión de moléculas en células (ej. PD-1).
- Comparación entre células de pacientes y controles normales.

Separación de CD8+ y CD4+:
- Marcaje con anticuerpos.
- Citómetro especial carga diferencialmente gotitas conteniendo las células.
- Aplicación de campo magnético separa las células según carga (negativo/positivo).
- Recuperación de células específicas mediante tubos de recolección.